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高效液相色譜法分析玉屏風散成分(一)

北納吳文文 -会员头像-www.biaowu.com北纳生物
北納吳文文 2020-08-13 08:53 評論( 0 ) 浏覽( 18 )

玉屏風散出自宋代張松的《究原方》,由黃芪、白術和防風組成,具有益氣固表止汗的功效,可以治療中醫學的各種汗證虛症,爲中醫“扶正固本”的經典名方。現代藥理研究表明玉屏風散還具有抗腫瘤、免疫調節、抗氧化等方面的功能。

複方配伍是中醫用藥最重要的特點之一,複方質量穩定是藥物劑量准確的基礎和前提。目前市面上中藥飲片的來源渠道多、範圍廣,市售飲片對方劑質量一致性的影響值得探討。指紋圖譜是中藥一致性評價、複方解析和研究的主要手段之一,已用于玉屏風散的質量評價。文獻報道的玉屏風散水

煎液高效液相色譜指紋圖譜因流動相梯度洗脫條件不理想而分離效果欠佳。

笔者以乙腈 –0.05%磷酸水为流动相,优化洗脱条件,对市售药材饮片制备的玉屏风散进行色谱分析,利用高效液相色谱指纹图谱技术,从全化学成分的角度探讨市售饮片对该方剂组成一致性的影响,为玉屏风散的质量控制和评价提供依据。

1 实验部分

1.1 主要仪器与试剂

高效液相色谱仪:1260 型,配置四元泵、全自动进样器、DAD二极管阵列检测器、高效液相色谱工作站,美国安捷伦科技有限公司;

旋转蒸发仪:EYELA OSB–2100型,日本东京理化器械株式会社;

台式离心机:Heraeus Biofuge Primo R 型,美国赛默飞世尔科技有限公司;

中藥指紋圖譜相似度評價系統軟件:2004A,國家藥典委員會;

乙腈:色譜純,美國費希爾公司;

甲醇:色谱纯,山东禹王和天下新材料有限公司;毛 蕊 异 黄 酮 苷(M–020–170926)、升 麻 素 苷(S–004–170827)、 升 麻 素(S–007–170429)、5-O-甲 基 维 斯 阿 米 醇 苷(J–002–170731)、白 术 内 酯 Ⅲ(B–035–160822)、3-羟 基 -9,10-二 甲 氧 基 紫 檀 烷(Q–057–171011)对照品:纯度均大于 98%,成都瑞芬思生物科技有限公司;

对照药材蒙古黄芪(120974–201612)、膜荚黄芪(121462–201304)、白 术(120925–201611)、防 风(120947–201409):中国食品药品检定研究院;

中药材饮片:来源列于表 1,所有饮片均由山东中医药大学张芳副教授鉴定为正品,黄芪为豆科植物蒙古黄芪或膜荚黄芪的干燥根,(炒)白术为菊科植物白术的干燥根茎的麸炒品,防风为伞形科植物防风的干燥根;

實驗用水爲娃哈哈純淨水。

1.2 色谱条件

色 谱 柱:Agilent Eclipse XDB–C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm,美国安捷伦科技有限公司);

流量:1 mL/min;

柱溫:30℃;

进样体积:20 μL;

流动相:以乙腈为流动相 A,以0.05%磷酸水为流动相B,按表2所示浓度变化进行梯度洗脱,进样前以初始流动相条件平衡20 min;

检测波长:230 nm。

1.3 玉屏风散饮片样品溶液的制备

按照《究原方》中玉屏风散配比,取黄芪饮片 6 g、(炒)白术饮片6 g、防风饮片3 g,粉碎,加入10倍量纯净水浸泡30 min,加热回流40 min,过滤;向药渣中加入5倍量纯净水,加热回流20 min,过滤,合并滤液并混匀,于40℃浓缩至相当于原药材含量1.0 g/mL。


取玉屏风散浓缩液 4 mL,置于10 mL容量瓶中,加入甲醇至标线,振摇混匀,于4℃冰箱中放置过夜,将混悬液抽滤,取续滤液,过0.45μm微孔滤膜,得玉屏风散饮片样品溶液。将购自不同药店的10批饮片,按上述方法制备玉屏风散饮片样品溶液10份。

1.4 标准方剂对照溶液的制备

取对照药材蒙古黄芪 0.2 g、白术0.2 g、防风0.1 g,加入50倍量纯净水浸泡30 min,于60℃超声提取20 min,过滤;向药渣中加入25倍量纯净水,于60℃超声提取10 min,过滤,合并滤液并混匀,挥干溶剂,向残渣加入60%甲醇溶液超声溶解,至药液浓度相当于原药材含量0.4 g/mL,振摇混匀,于4℃冰箱中放置过夜,将混悬液以12 000 r/min离心,取上清液,得标准方剂对照溶液。

按上述方法制備膜莢黃芪複方、空白對照溶液對與單味藥材溶液。

1.5 对照品溶液的制备

取毛蕊异黄酮苷、升麻素苷、升麻素、5-O- 甲基维斯阿米醇苷、白术内酯Ⅲ、3-羟基-9,10-二甲氧基紫檀烷对照品适量,精密称定,用甲醇溶解,制得质量浓度均为100μg/mL的对照品溶液,摇匀,于4℃冰箱中储存备用。

1.6 实验方法

采用高效液相色谱法按 1.2 色谱条件测定玉屏风散饮片样品溶液、标准方剂对照溶液、空白对照溶液与单味药材对照品溶液,得各复方、药对、单味药高效液相色谱指纹图谱,计算各批玉屏风散样品之间、各批玉屏风散样品与标准方剂之间指纹图谱的相似度,对复方指纹图谱中的主要色谱峰进行归属,探讨市售饮片对玉屏风散质量一致性的影响。

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